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应用噬菌体随机肽库确定猪瘟病毒gp55抗原表位的研究

批准号30060063 学科分类城市地理学 ( D010203 )
项目负责人董锁成 负责人职称 依托单位内蒙古农业大学
资助金额0.00
万元
项目类别面上项目 研究期限2001 年 01 月 01 日 至
2003 年 12 月 01 日
中文主题词噬菌体随机肽库;猪瘟病毒;表位;克隆;序列分析
英文主题词random peptide library;classical swine fever virus;antigentic epitope;cloning ;nucleotide sequence analysis

摘要

中文摘要 本项目拟应用噬菌体展示多肽库技术确定猪瘟病毒主要保护性抗原gp55的线性表位,分析比较标准强毒株、野毒株和疫苗株在gp55抗原表位上氨基酸残基的异同。通过此研究可以揭示猪瘟病毒抗原变异的分子机制,为进一步深入研究我国猪瘟病毒分子流行病学奠定基础,最终为猪瘟的防制和诊断提供科学依据。
英文摘要 The current study was designed to indentify the linner antigetic epitope of CSFV-gp55 through screening random peptide library.Using CSFV-gp55 monoclonas antibodie (McAb)as selective molecule, a phage display peptide library was biopanned and posititive clones were indentified by.ELLSA,DNA sequencing and amino acid analysis.After three biopanning,the rate of positive phage clones screened out is 91.7%;ELLSA indentifid that the positive clones can be recognized effectively by CSFV-gp55 monoclonas antibodie (McAb),and the consensus sequence(KEYNHDL) were found through amino acid sequence analysis of 7 positive clones,which was similar to gp55 720 KEYNHDL726?,after indentifing the??linner antigetic epitope,the E2?gene of two prevalent strains of CSFV from Inner Mongolia and C strains and SHIMEN strains were amplifified by reverse trascription (RT) and polymerase chain reaction ,cloning and nucleotide sequense. The nucletide homoloy between C stains and shimen were 98.3%,and that of amino acide were 99.2%.The homoloy of amino acide of two prevalent strains of CSFV from inner mengolia between shimen ,Cstrains were over 94%.particulally in antigentic epitope, there were no difference between the four CSFV strains.
结题摘要 本研究利用噬菌体随机七肽库来确定猪瘟病毒囊膜蛋白gp55的线性表位。把猪瘟病毒囊膜蛋白gp55特异的单克隆抗体作为筛选分子,生物淘洗噬菌体七肽库,将筛选的噬菌体阳性克隆进行ELLSA检测、DNA序列测定及展示肽的氨基酸序列推导和分析。通过3轮生物淘洗,能被特异性单抗捕获的噬菌体克隆为91.7%(11/12),ELLSA 测定显示筛选到的噬菌体短肽能与gp55单抗特异性的结合,序列分析表明七个阳性克隆有相同的氨基酸核心序列KEYNHDL,同源性分析显示该序列与囊膜蛋白gp55的720-726位氨基酸有较高的同源性,表明该区可能是gp55单抗识别的表位。确定表位后,对石门强毒、猪瘟兔化弱毒、内蒙古野毒株进行了E2基因的全长RT-PCR、并克隆在PGEM-T载体上,随后对其进行a-互补、酶切、PCR鉴定和序列测定,应用DNAStar序列分析软件对所测毒株进行氨基酸同源性分析。?结果发现,猪瘟兔化弱毒和强毒间核苷酸和氨基酸的同源性分别为98.3%、99.2%。野毒株与猪瘟兔化弱毒和强毒间核苷酸和氨基酸的同源性也分别在94%以上,在gp55的720-726氨基酸的位置上也没有氨基酸差异

成果

序号 标题 类型 作者
1 应用噬菌体随机肽库筛选猪瘟病毒囊膜蛋白gp55的抗原表位 著作 王潇|李富强|郝永清|

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