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精氨酸tRNA及亮氨酸tRNA基因的克隆和表达

批准号39570164 学科分类环境地球化学 ( D0707 )
项目负责人刘小汉 负责人职称 依托单位中国科学院上海生命科学研究院
资助金额0.00
万元
项目类别重点项目 研究期限1996 年 01 月 01 日 至
1998 年 12 月 01 日
中文主题词tRNA基因 克隆 表达
英文主题词tRNA gene; cloning; expression

摘要

中文摘要 用化学合成法和重组DNA方法,将大肠杆菌精氨酸tRNA2,亮氮酸tRNA1和亮氨酸tRNA2基因分别连接到高表达质粒上,转化到大肠杆菌受体菌中,通过DNA序列测定筛选到以上tRNA的基因。以上基因都得到在大肠杆菌中的高表达。与受体菌相比,精氨酸tRNA高表达40倍、亮氨酸tRNA分别高表达7.5和30倍。在总tRNA中它们的含量分别为70%、50%和30%。从2升培养液中可分别得到9、6和3毫克、纯度为95%以上的上述tRNA。该研究结果证明了采用的研究方法的可行性,产生了直接的经济效益,为“氨酰tRNA合成酶及其与相关tRNA的相互作用”理论研究奠定了物质基础。
英文摘要 By using the methods of chemical synthesis and recombinant DNA, the genes encoding tRNA(Arg)2, tRNA(Leu)1 and tRNA(leu)2 from Eschericia coli were ligated into plasmid,respectively. E.coli host cells were transformed with the recombinant plasmids. The correct genes were confirmed and chosen by DNA sequencing.The above genes were overexpressed in E.coli. Compared with the production from host cell, that of tRNA(Arg)2 was increased 40-fold, that of tRNA(Leu)1 and tRNA(Leu)2 were 7.5 and 30-fold in overproduction strains, respectively. 70%、50%and 30% in the total tRNA isolated from the overproduction strains were tRNA(Arg)2, tRNA(Leu)1 and tRNA(Leu)2. 9,6 and 3 mg of tRNA(Arg)2, tRNA(Leu)1 and tRNA(Leu)2 with 95% homogeneity were isolated from 2-liter cultures, respectively. The data showed that the method is useful and efficient to produce large amount of tRNA for study the interaction between aminoacyl-tRNA synthetases and their cognate tRNAs.
结题摘要

成果

序号 标题 类型 作者
1 Gene cloning, overproduction and purification of Escherichia coli tRNA(Arg)2 期刊 Wu Jin-Fu|Wang En-Duo|Wang Ying-Lai|
2 Overproduction and purificaion of Escherichia coli tRNALeu 期刊 Li Yong|Wan En duo|Wan Ying lai|
3 大肠杆菌tRNALeu的基因克隆、高效表达和纯化 期刊 李勇|王恩多|王应睐|

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