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肠三叶因子受体cDNA的筛选、受体蛋白氨基酸序列分析及结构预测

批准号30570844 学科分类消化道内环境紊乱、黏膜屏障障碍及相关疾病 ( H0306 )
项目负责人彭曦 负责人职称研究员 依托单位中国人民解放军第三军医大学
资助金额26.00
万元
项目类别面上项目 研究期限2006 年 01 月 01 日 至
2008 年 12 月 31 日
中文主题词肠三叶因子;肠三叶因子受体;肠上皮细胞;cDNA文库;氨基酸序列
英文主题词

摘要

中文摘要 肠三叶因子(ITF)是一种特异分布于肠道的具有"三叶草型"空间结构的特殊生长因子,对肠道具有很强的保护作用。对ITF受体的研究有助于阐明ITF促进细胞增殖、减轻损伤、促进修复的机制及可能的信号转导通路。本研究在已获得重组表达ITF的基础上,进行ITF受体的相关研究,首先采用同位素标记ITF,通过受体结合和受体定位实验对肠上皮细胞膜上ITF受体进行定量和定位研究,并对ITF及其受体的结合特性进行初步分析。在此基础上采用分子筛、亲和层析等手段分离、纯化ITF受体,获取的受体蛋白通过氨基酸末端序列分析,合成特异的ITF受体探针。在成功构建肠上皮细胞cDNA文库的基础上,通过2次杂交筛选ITF受体全长cDNA,推导其全长氨基酸序列,数据库比对后进行受体蛋白结构和功能预测,为进一步研究ITF的信号转导机制打下基础。
英文摘要
结题摘要 肠三叶因子(ITF)是一种特异分布于肠道的具有"三叶草型"空间结构的特殊生长因子,对肠道具有很强的保护作用。对ITF受体的研究助于阐明ITF促进细胞增殖、减轻损伤、促进修复的机制及可能的信号转导通路。本研究在已获得重组表达ITF的基础上,进行了ITF受体的相关研究,首先采用同位素标记ITF,通过受体结合和受体定位实验对肠上皮细胞膜上ITF受体进行定量和定位研究,并对ITF及其受体的结合特性进行初步分析。在此基础上采用分子筛、亲和层析等手段分离、纯化ITF受体,获取的受体蛋白通过氨基酸末端序列分析,合成特异的ITF受体探针。在成功构建肠上皮细胞cDNA文库的基础上,杂交筛选ITF受体全长cDNA,推导其全长氨基酸序列。实验结果显示,肠上皮细胞膜上具有ITF特异受体,该受体不是EGFR,而是ITIH4蛋白。本研究为进一步研究ITF的信号转导机制奠定了基础。

成果

序号 标题 类型 作者

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