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凝血因子Ⅶ-L蛋白纳米粒靶向介导decoy基因干预血栓前状态的实验研究

批准号30570774 学科分类出血、凝血与血栓 ( H0811 )
项目负责人胡豫 负责人职称教授 依托单位华中科技大学
资助金额27.00
万元
项目类别面上项目 研究期限2006 年 01 月 01 日 至
2008 年 12 月 31 日
中文主题词血栓前状态;血管内皮细胞;重组凝血因子FⅦ-L蛋白粒;组织因子
英文主题词

摘要

中文摘要 血管内皮细胞受损引起组织因子表达是血栓前状态及众多血栓性疾病的关键启动因素之一。本课题利用FⅦ与组织因子特异性结合的特性,应用基因工程技术,合成乙肝病毒包膜蛋白与FⅦ片段的融合蛋白- - FⅦ粒子,在这种平均内径80纳米的中空球形分子内包裹能干预组织因子表达的NF-κB decoy寡核苷酸,一方面,FⅦ粒子通过与受损内皮细胞表面表达的组织因子的特异性结合,阻断凝血因子Ⅶ与组织因子的结合,同时,由FⅦ粒子靶向导入内皮细胞中的NF-κB decoy能抑制组织因子的表达,从而在功能和分子水平上阻止血栓前状态发展。本研究将为预防内皮细胞高表达组织因子导致的血栓前状态提供更为特异和有效的基因治疗方法,并为其它疾病提供一种具有靶向性和安全高效的新型给药模式。
英文摘要
结题摘要 靶向治疗是现代疾病治疗研究中的热点之一。在前期研究基础上,该项目提出将纳米技术与Decoy策略相结合,通过制备载decoy片段的VII-L蛋白纳米粒,在转录水平对血栓形成关键因子组织因子(TF)进行定向调控,从而达到纳米靶向干预血栓前状态的目的。为此,研究者建立了大鼠脑血栓前状态模型,运用生物工程方法制备FVII-L蛋白纳米粒并对其生物学功能进行了鉴定,在动物模型体内外成功实现了decoy靶向干预。结果表明:1)采用LPS刺激TF高表达的方法及光化学诱导法建立了可靠的大鼠血栓前状态模型。2)通过克隆大鼠FVII上EGF1片段,发现EGF1肽段可与TF相结合且不具促凝血功能,可导向脑血栓形成部位。3)构建的融合基因表达载体PQE3X-FⅦ-L及pPIC9K-FⅦ-L可在大肠杆菌和毕赤酵母内稳定表达,该蛋白理化性质进一步表征为生物蛋白纳米粒形成的关键。4)通过合成一段核心序列与TF启动子顺式作用元件κΒ结合位点序列相同的寡核苷酸,竞争性抑制与NF-κΒ结合,能明显降低血栓前状态动物模型中TF的表达,减少血栓形成。该项目率先探索了血栓性疾病的纳米靶向治疗,为此类疾病的治疗研究开辟了新思路。

成果

序号 标题 类型 作者
1 大鼠凝血因子Ⅶ EGFP-EGF_1融合蛋白的表达及其结合功能初步研究 期刊
2 大鼠凝血因子ⅦEGF1片段结合功能的体外研究 期刊
3 三种分离大鼠主动脉内皮细胞方法的比较研究 期刊
4 The potential biomarkers for thromboembolism detected by SELDI-TOF-MS 期刊
5 Potential Biomarkers of Acute Cerebral Infarction Detected by SELDI-TOF-MS 期刊

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