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诱导胚胎干细胞分化为小肠上皮细胞

批准号30470778 学科分类消化道内环境紊乱、黏膜屏障障碍及相关疾病 ( H0306 )
项目负责人陈其奎 负责人职称教授 依托单位中山大学
资助金额21.00
万元
项目类别面上项目 研究期限2005 年 01 月 01 日 至
2007 年 12 月 31 日
中文主题词胚胎干细胞;小肠上皮细胞;诱导分化;细胞移植
英文主题词

摘要

中文摘要 各种原因引起的小肠上皮形态和功能受损,导致严重的消化吸收不良;以及迁延不愈的肠瘘和Crohn's病是内外科临床面临的棘手问题。本课题首先在已经初步分离胎鼠小肠上皮干细胞和体外培养、诱导鼠E14胚胎干细胞(ESC)分化的基础上,以小肠上皮发育生物学的研究进展为依据,用不同的诱导方案体外诱导鼠E14 ESC 向小肠上皮细胞分化,建立最优化的诱导分化体系。分析诱导分化过程中细胞表型与核型的变化,并在体外培养和Scid鼠体内移植鉴定其生物学特征、功能和安全性,证明诱导的细胞具有小肠上皮细胞的特性。将诱导细胞移植到经致死性放射剂量照射的雌性鼠体内,通过原位杂交和荧光示踪技术等确定移植细胞能否定位于病损小肠粘膜及其体内增殖能力,并且观察移植细胞重建受损的小肠粘膜和治疗小肠瘘、Crohn's病的疗效。为大量获取小肠上皮细胞进行小肠上皮细胞移植的实验与临床研究提供技术支持和供体来源。
英文摘要
结题摘要 目的:研究小肠间质细胞上清液和EGF、HGF对诱导ESC向小肠上皮分化的作用,探索优化的分化诱导体系;观察诱导后的ESC在小鼠小肠内定植的情况。方法:ESC在悬滴培养法制备拟胚体(EB),应用小肠间质细胞上清液、EGF及HGF诱导,经形态学、RT-PCR及裸鼠皮下接种检测细胞性质;诱导分化后的细胞经EGFP标记后通过尾静脉注射入放射损伤小鼠体内,取小肠、肝组织标本,在荧光显微镜下直接检测荧光细胞的定植情况。结 果:EB经诱导11d左右,上清组大部分分化为上皮样细胞,呈现较好的均质性, EGF、HGF组上皮样细胞分化也较多;各诱导组LPH和SI的mRNA表达水平均高于阴性对照组,上清组的LPH和SI 的mRNA表达均高于其他诱导组,EGF组表达高于HGF组;上清组有较高的Msi-1、Hes-1、Cdx2和CK19 表达;裸鼠皮下肿物切片上清组可见较多管腔,内见绒毛样结构,有柱状上皮细胞和杯状细胞;损伤小肠的绒毛及隐窝有较多荧光细胞定植,而肝组织少见。结 论:小肠间质细胞上清液和EGF对诱导ESC向小肠上皮样细胞分化有明确的促进作用;经诱导分化的ESC可以定植于放射损伤小鼠的小肠上皮组织。

成果

序号 标题 类型 作者
1 诱导E14小鼠胚胎干细胞分化为小 奖励 邰艳红 纪华英 陈其奎
2 体外定向诱导E14小鼠ESC分化为小 奖励 纪华英 陈其奎

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