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硒蛋白P受体的分离、鉴定和功能的研究

批准号30400098 学科分类脂质生物化学 ( C0510 )
项目负责人朱玉山 负责人职称教授 依托单位中国科学院动物研究所
资助金额18.00
万元
项目类别青年科学基金项目 研究期限2005 年 01 月 01 日 至
2007 年 12 月 31 日
中文主题词硒蛋白P;受体;基因克隆;细胞转运
英文主题词

摘要

中文摘要 硒蛋白P是一种血浆硒蛋白,人血浆总硒量的50-60%存在于硒蛋白P中。它在肝脏合成、分泌至血浆后,能转运到机体不同细胞。在细胞内作为重要的抗氧化剂分子,参与细胞内许多的代谢过程。硒蛋白P含多个硒代半胱氨酸,而编码硒代半胱氨酸的密码子为中止密码子,很难在体外表达全长蛋白分子。我们首次分离纯化了完整硒蛋白P蛋白分子。根据已有的研究结果,我们提出细胞膜上可能存在硒蛋白P的受体。为验证这一设想,我们将表达纯化的硒蛋白P偶联到乳胶纳米微球上,利用这种方法特异性与细胞膜蛋白免疫共沉淀,进而分离和纯化硒蛋白P受体;采用HPLC-MASS和NMR等技术对分离到的受体进行分析鉴定,然后再克隆受体基因、蛋白表达和抗体制备。在此基础上,我们将深入研究硒蛋白P与受体相互作用后进入细胞的转运途径,了解其参与细胞代谢的分子基础。
英文摘要
结题摘要 我们主要集中在采用生物化学和分子生物学的方法验证硒蛋白P受体的存在和功能。 首先我们完成的硒蛋白P蛋白的纯化表达和抗体制备,为进一步研究提供了很好的基础;采用pull down等方法证实了硒蛋白P存在两种以上的受体蛋白存在;进一步研究采用细胞生物学和生物化学的方法在神经细胞SY5Y细胞和肝肿瘤细胞HepG2证实了硒蛋白P受体的存在,同时是Clathrin依赖的途径,验证了后来Burk发表证实的ApoER-2介导细胞自吞途径是相同的。

成果

序号 标题 类型 作者

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