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细胞从静止期到增殖期转换的蛋白质组学研究

批准号30671066 学科分类细胞生长与分裂 ( C0702 )
负责人何大澄 职称教授 单位名称北京师范大学
资助金额 30万元 项目类别 01 起止年月 2007年01月01日 至 2009年12月31日
主题词 细胞周期;静止期/增殖期转化;动态蛋白质组学;蛋白质组
附注说明 在细胞周期常述及的四个时相之外,还存在着一个认识很肤浅的增殖静止期或G0期。关于细胞静止期的本质特别是向增殖期转换过程中的事件及其调控机制更是所知甚少。但对增殖休止期的研究,在肿瘤发生与防治、干细胞研究等方面显然具有重要的基础研究和潜在应用价值。本研究拟综合体内和培养细胞两种细胞休止/增殖转化模型,在本实验室多年来对细胞周期调控和蛋白质组学研究的基础上,采用双向电泳、串联质谱等技术,研究细胞在休止/增殖转换中的蛋白质组动态变化样式(Pattern),以期在蛋白质组学的层面上对细胞静止期重新界定,力求阐明细胞从静止到增殖转换的过程;并对一些未知蛋白或功能未知的蛋白,运用分子生物学手段研究其在细胞增殖中的作用。此项工作从动态蛋白质组的角度上解释细胞静止期/增殖期转换这一重要细胞生物学问题,对肿瘤发生机制、干细胞研究和细胞分化与发育等领域的研究具有重要的潜在意义并提供新的研究线索。

成果

序号 课题 类型 参与人
0 PHP14: a novel regulator in lung cancer tumorigenesis and metastasis. 期刊
1 A high-temporal resolution technology for dynamic proteomic analysis based on 35S labeling. 期刊

摘要

结题摘要 本课题以大鼠肝2/3切除和A549细胞血清饥饿为G0/G1转化点研究的体内外模型,采用同位素35S标记并结合双向电泳和质谱分析,成功建立了细胞G0/G1 期转换的不同时间点的、系统的、高时间分辨率的动态蛋白质组学变化图谱。在体外和体内模型分别筛选和鉴定出164个和35个动态差异蛋白,其中一些是首次得到鉴定。在课题执行期间,完全自主开发了SiLAD(S35 in vivo Labeling Analysis for Dynamic Proteomics)动态分析技术。实验结果表明SILAD技术具有下述优势及广泛应用价值(1)可获得在现有技术中无法检测到的蛋白及其动态变化;(2)在考染中无变化的点,但在35S标记中有明显的变化(细胞内存在的蛋白总量没有明显变化,但在某些时间点蛋白合成速度有差异);(3)重叠在一起或掩盖在其他高峰度蛋白下的蛋白点可以被显示出来(通过其蛋白合成速率的差异而区分开);(4)一些蛋白在35S标记中无差异,但在考染总有明显的变化,两种检测方法结合起来提示他们可能在蛋白分解,修饰及其他代谢上的差异。

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