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胚胎干细胞特异表达新基因HPESCRG1及mPESCRG1的功能研究

批准号30570937 学科分类细胞生长与分裂 ( C0702 )
负责人杜娟 职称副研究员 单位名称中南大学
资助金额 24万元 项目类别 01 起止年月 2006年01月01日 至 2008年12月31日
主题词 胚胎干细胞;新基因;功能研究;RNA干扰;显微注射
附注说明 胚胎干细胞,尤其是人类胚胎干细胞体外保持自我更新和不分化状态是其用于细胞替代治疗及组织工程的基础,也是干细胞生物学研究的一个热点和重点。我们以拥有自主知识产权的人类胚胎干细胞为材料,克隆了人类胚胎干细胞特异表达新基因HPESCRG1及其小鼠同源基因mPESCRG1。本项目将应用基因过表达技术和RNA干扰等技术从正反两方面探讨新基因在胚胎干细胞维持不分化状态过程中的可能作用,并初步探讨新基因与LIF通路、Oct4和Nanog等胚胎干细胞调控因子的可能关系;结合显微注射技术研究mPESCRG1在小鼠植入前胚胎发育过程中的作用;利用GAL4-报告系统研究新基因编码蛋白是否含有转录激活域。这些研究将为进一步阐明维持胚胎干细胞自我更新和不分化状态的分子调控机制,了解新基因HPESCRG1及mPESCRG1的功能提供重要的数据,同时也为后续的深入研究奠定良好的基础。

成果

序号 课题 类型 参与人
0 Expression Research for a Novel Human HPESCRG1 ( Dppa2 ) Gene as a Candidate Gene Maintaining the Undifferentiated State of Human Embryonic Stem Cells 会议
1 Borealin is differentially expressed in ES cells and is essential for the early development of embryonic cells. 期刊
2 RNAi-mediated knock-down of gene mN6A1 reduces cell proliferation and decreases protein translation 期刊
3 Expression of Dppa2 during the Differentiation of Human Embryonic Stem Cells 期刊

摘要

结题摘要 项目组以往以hESC为材料克隆的HESCRG1/Mescrg1基因即文献报道的DPPA/Dppa2基因,但该基因在ESC中的作用尚不清楚.本项目在NSFC的资助下,对DPPA2/Dppa2在ESC中的功能进行了研究.DPPA2的表达谱研究表明该基因仅在ESC等多能性细胞中表达,在分化细胞中不表达,与OCT4,NANOG和SOX2相似;在ESC自发分化形成EB和RA诱导ES细胞分化过程中, DPPA2/Dppa2基因的表达显著下调;DPPA2/Dppa2蛋白定位在细胞核内,DPPA2具有一定的转录激活活性. Dppa2的RNA干扰引起mESC AKP活性下调,Oct4和Nanog等全能性基因表达下调,内胚层和滋养外胚层标志基因Fst和Psx1明显上调;并抑制mESC的增殖. Oct4的RAN干扰引起Dppa2的显著下调, CHIP试验显示Oct4能与Dppa2的启动子区域结合.研究表明DPPA2/Dppa2在ESC特异表达,该基因具有转录激活活性,它的表达抑制引起ESC的分化并影响其增殖,DPPA2/Dppa2可能受到Oct4的调控,与Oct4一起参与维持ESC的特性.

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