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Pals1在建立胃壁细胞极性过程中的功能研究

批准号30570926 学科分类细胞、亚细胞结构与功能 ( C0701 )
负责人曹新旺 职称副教授 单位名称中国科学技术大学
资助金额 24万元 项目类别 01 起止年月 2006年01月01日 至 2008年12月31日
主题词 胃壁细胞;Pals1;细胞极性
附注说明 胃壁细胞在极化过程中由于参与极性形成的复合物中不同蛋白质的相互作用而形成了顶膜与底膜功能域。Pals1在维系上皮细胞极性的紧密连接中起着不可或缺的作用。我的最新工作揭示了Pals1与ezrin的相互作用并阐明Pals1对ezrin在顶膜定位的重要性。我拟以胃壁细胞为模式系统,利用pull down与酵母双杂交技术,同时结合功能蛋白质组学,分离和鉴定与Pals1相互作用的蛋白质,进而进行基因克隆、蛋白表达以及抗体制备。我将利用siRNA,免疫荧光,免疫共沉淀以及活细胞实时观察等技术评估Pals1及其结合蛋白在胃壁细胞极性建立与维持过程中的功能。同时,我还计划通过缺失突变及pull down等技术,确定Pals1与ezrin发生相互作用的domain,并对其进行功能评定。我相信该项研究的开展将为阐明Pals1在建立与维持细胞极性过程中的分子机制及进一步描绘胃壁细胞胞吐过程的生化通路奠定基础。

成果

序号 课题 类型 参与人
0 Helicobacter pylori VacA disrupts apical membrane cytoskeletal interactions in gastric parietal cells 期刊

摘要

结题摘要 极化细胞的主要特征是大分子和细胞器的不对称性分布,细胞极性的建立和维持需要蛋白质不断地被运输到膜的不同位置,胃壁细胞在极化过程中由于参与极性形成的复合物中不同蛋白质的相互作用而形成了顶膜与底膜功能域。Pals1在维系上皮细胞极性的紧密连接中起着不可或缺的作用。我们的工作揭示了Pals1与膜-骨架连接蛋白Ezrin的相互作用并阐明了Pals1对Ezrin在顶膜定位的重要性。通过酵母双杂交筛选并结合蛋白质组学分析,我们发现Pals 1是Calpain I的一个新底物,并且Pals 1、 Calpain I与Ezrin共存在同一个复合体中。我们确定了Pals1与Ezrin发生相互作用的结构域。通过制备的Pals1的单克隆抗体、SiRNA、缺失突变体和腺病毒载体的Pals1,结合siRNA、免疫荧光、免疫共沉淀以及活细胞实时观察等技术,我们进一步评估了Pals1及其结合蛋白在胃壁细胞极性建立与维持过程中的功能。我们的研究结果为阐明Pals1在建立与维持细胞极性过程中的分子机制及进一步描绘胃壁细胞胞吐过程的生化通路奠定了基础。

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